一项双盲临床试验，比较基于多氨基酸的ORS与标准WHO-ORS在婴幼儿非霍乱急性水样腹泻管理中的有效性和安全性:“VS002A”试验方案

背景

腹泻是全球五岁以下儿童第二大致命疾病，发展中国家的情况更为严重。口服补液液(ORS)长期以来被作为治疗急性水样腹泻的标准疗法。我们的目的是比较氨基酸型ORS“VS002A”与标准葡萄糖型WHO-ORS在患有急性非霍乱水样腹泻的婴幼儿中的疗效。

方法

这是在达卡icddr医院进行的一项随机、双盲、双细胞临床试验。本研究共纳入312例6-36月龄男性急性非血性水样腹泻患儿。干预组参与者获得基于氨基酸的ORS (VS002A)，控制组获得基于标准葡萄糖的WHO-ORS。主要疗效终点为院内腹泻的持续时间。

讨论

口服补液疗法(ORT)使用目前的ORS配方有一定的局限性——它不能减少腹泻的量、频率或持续时间。此外，目前的标准口服补液盐不能显著减少排便量，这可能导致母亲对口服补液盐的使用相对有限，因为她们认为口服补液盐不能帮助她们的孩子从腹泻发作中恢复。某些中性氨基酸(如甘氨酸、l -丙氨酸、l -谷氨酰胺)可以增强肠道对钠离子和水的吸收。利用这一概念，一种名为“VS002A”的耐储存、无糖氨基酸水合药用食品被开发出来，它能有效地补充水分，并在胃肠道感染后改善肠道的屏障功能。如果试验显示使用VS002A的显著益处，这可能提供证据支持在目前的世卫组织腹泻管理指南中考虑使用VS002A。相反，如果没有益处的证据，这些结果将重申当前的指导方针。

试验注册

ClinicalTrials.govNCT04677296．2020年12月21日注册。

腹泻病是全球五岁以下儿童第二大致命疾病，发展中国家的情况更为严重。长期以来，口服补液液(ORS)一直被用作急性水样腹泻的标准治疗方法[1］．世界卫生组织/联合国儿童基金会目前推荐的口服补液盐含有葡萄糖、氯化钠、氯化钾和柠檬酸三钠脱水，最适合任何病因的急性腹泻脱水的所有年龄的患者[2］．然而，目前的ORS配方有一定的局限性[3.］．它不会减少腹泻的量、频率或持续时间。此外，目前的标准口服补液盐无法显著减少排便量，这可能导致母亲对口服补液盐的使用相对有限，因为她们认为口服补液盐无法帮助她们的孩子缓解腹泻[4］．因此，它保证了开发一种更新和改进的口服补液盐配方，以更有效地治疗腹泻。

添加中性氨基酸或其多肽可以增强钠离子和水的吸收，这是一种通过向WHO-ORS中添加中性氨基酸或其多肽来开发改进ORS配方的方法[5］．Enterade®是一种由五种氨基酸(苏氨酸、缬氨酸、丝氨酸、酪氨酸和色氨酸)组成的专利混合物，通过促进肠道钠和水的运输，以与葡萄糖相似的化学计量计量来迅速恢复水分和电解质的损失[6]，但不会像葡萄糖那样刺激氯化物的分泌[7］．基于先前关于氨基酸型ORS的研究结果，开发了一种名为VS002的无糖自稳定氨基酸型水合药用食品，在胃肠道感染后有效地补水并改善肠道的屏障功能[8］．利用这一概念，佛罗里达大学(UF)开发了一种无糖、耐储存的氨基酸水合药用食品，名为“VS002A”，可以有效地补水，并在胃肠道感染后改善肠道的屏障功能。因此，我们的目的是了解VS002A在治疗婴幼儿急性非霍乱水样腹泻方面是否优于WHO-ORS。

肠道健康生物标志物

5岁以下儿童腹泻病导致43%的发育迟缓和认知发育受损，影响着全世界五分之一的儿童和中低收入国家(中低收入国家)三分之一的儿童[9，10］．肠道感染和营养不良的恶性循环经常导致幼儿长时间出现肠道病[9，11］．这种类型的肠病被称为环境肠功能障碍(EED)。EED是一种病因不明的小肠黏膜亚急性炎症状态[12］．其特点是小肠结构改变，包括绒毛萎缩和隐窝增生，影响营养吸收和致病屏障(渗透性和炎症细胞增加)，肠道免疫功能受损，吸收不良，生长迟缓，一般无症状，与腹泻病不同[11，13］．瓜氨酸(CIT)是肠上皮细胞产生的一种氨基酸，肠病患者体内瓜氨酸含量较低[14］．色氨酸(TRP)是一种植物来源的必需氨基酸(EAA)，是支持人类生长和健康所必需的。在对感染的反应中，色氨酸主要由吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)分解为毒性代谢物犬尿氨酸(KYN)。低血浆TRP、高KYN和升高的色氨酸-kyanurenine (KT)比值被发现与感染和慢性免疫激活有关[10］．

包括孟加拉国在内的低收入和中等收入国家关于腹泻儿童肠道壁炎症和病理变化(如EED)的数据有限。在本研究中，我们还评估了血浆CIT浓度作为肠细胞功能质量和肠道吸收功能的潜在标志，以及KT比率作为肠道炎症的标志。

目的

VS002A试验的主要目的是在一项优势试验中，比较基于氨基酸的ORS“VS002A”与基于标准葡萄糖的WHO-ORS (GORS)对急性非霍乱水样腹泻的婴幼儿的疗效(腹泻持续时间、粪便排出量、ORS摄入量和临床成功)。我们的目标是(i)评估和比较临床反应(腹泻持续时间[主要终点]，排便量，ORS摄入量，(ii)在一项优势试验中，评估和比较以葡萄糖为基础的WHO-ORS和以氨基酸为基础的ORS“VS002A”治疗急性非霍乱水样腹泻的婴幼儿中电解质失衡作为可能的并发症的探索性终点。

我们的次要目的是调查脱水腹泻患儿的血浆CIT浓度和KT比，并检查CIT浓度和KT比与并发因素之间的关系。

研究设计

VS002A试验是一项比较WHO-ORS和VS002A的随机、双盲、双细胞优势临床试验，在312名6-36个月的男性儿童中进行，这些儿童在达卡icddr医院出现非血性急性非霍乱腹泻并伴有部分脱水。

试验方案由孟加拉国达卡营养和临床服务部icddr,b的研究人员与Entrinsic Bioscience共同制定。研究设计如图所示1．

研究环境和人群

本研究在达卡icddr医院进行。研究对象为312名男性儿童(为了便于分别收集尿液和粪便)，住在达卡医院的icddr,b。

入选标准

1. 1.

   年龄:6-36个月

2. 2.

   腹泻持续时间≤48小时

3. 3.

   部分脱水(临床根据“达卡法”判断)[15］

4. 4.

   父母或监护人的书面知情同意

排除标准

1. 1.

   严重营养不良(体长体重WLZ/身高体重WHZ/年龄体重WAZ <−3或存在营养性水肿)

2. 2.

   因霍乱而腹泻的病人

3. 3.

   全身性疾病(如肺炎、肺结核、肠热和脑膜炎)

4. 4.

   腹泻带血

5. 5.

   任何先天性异常或疾病(例如，诊断为先天性代谢错误、先天性心脏病、癫痫发作、甲状腺功能减退和唐氏综合征)

6. 6.

   如果严重脱水，入院时静脉注射4小时后需要补充静脉输液

7. 7.

   有住院前48小时内服用抗生素和/或止泻药的记录。

实施计划

筛选和登记程序

所有6-36个月、出现腹泻(发病时间≤48小时)和部分脱水症状的男性儿童均由icddr,b达卡医院(分诊/门诊/短期住院病房)的研究护士进行筛查，以便纳入研究。在获得家长口头同意后，所有经筛选的儿童将被留在临床研究病房进行以下活动:

• 进行全面的临床病史和体格检查，测量体重和身高。

• 纠正部分脱水:根据icddr的补液方案，儿童接受标准WHO-ORS以纠正脱水，50-75 ml/kg，持续4小时，b [2］．在此期间，使用“Cholkit”快速筛查试验检测霍乱病例[16]，由一名研究护士进行。

同意

在确认合格后，向随行的主要照顾者提供进行Cholkit测试的书面知情同意。当Cholkit测试结果为阴性时，向护理人员提供另一份主要试验的书面知情同意书。对于不识字的护理人员，可获得书面见证的口头同意和指纹。在同意期间，试验团队的一名成员会用当地语言向护理人员解释研究的目的以及所有研究程序和可能的风险。收集、储存及使用所收集的样本已获同意。护理人员也被告知，他们可以选择参加试验，但不提供样本，或者他们可以在参加研究后随时退出参与。

序列生成

在符合研究资格标准并获得书面知情同意后，受试者通过可变排列块程序被单独随机分为VS002A和WHO-ORS两个研究组之一。然后，登记的患者根据他们在研究中的入院顺序获得一个识别号码。然后受试者使用预先定义的分配表随机分为四组之一。登记的患者接受与他们的识别号码相对应的连续编号的测试产品。

分配隐藏

包含治疗分配的信封由研究医生在参与者注册时打开。为了坚固，信封将是真正不透明的，按顺序编号，并以正确的顺序打开。在研究的所有数据收集阶段，治疗分配(一旦分配)将对参与者、现场首席研究员、共同研究者、现场研究工作人员和研究医生保持盲法。

致盲(屏蔽)

内在生物科学蒙蔽了研究产品。研究产品(VS002A和WHO-ORS)包装在310ml利乐纸盒中，除了随机的制造商序列号分为2组外，无任何区别，每个治疗组有2个单独的批号，可通过序列号前缀识别(例如，D-XXXX;G-XXXX;O-XXXX;U-XXXX)。整个产品组由VS002A或WHO-ORS组成。生成一个主文件，将组链接到产品标识;一张由一个人保管，另一张由icddr,b药房的高级药剂师保管。特定产品的身份对受试者、icddr、b达卡医院工作人员、赞助商和研究人员是盲法。由于VS002A和WHO-ORS之间的颜色、气味、味道和味道(柑橘类)相似，患者对干预措施真的是盲目的。 The final unblinding of product categories will occur only after statistical analysis.

登记和干预

在签署知情同意书后，参与者被纳入研究，并根据icddr,b预先确定的随机分组计划被分配到2个ORS组之一(每组156名儿童)。入组的儿童被随机分为四组:两组VS002A vs两组WHO-ORS。根据世卫组织指南，这两组患者都在接受腹泻病的标准治疗，包括补液、补充锌、营养咨询、随访和何时返回的指导。我们预计每月在达卡医院招募大约20名患者，在研究期间达到312名儿童的目标。

1. 我)

   2种不同口服补液溶液的组成(表1）

1. (二)

   高级氨基酸ORS安全性数据:VS002A

内源性生物科学氨基酸配方完全符合FDA 21 CFR要求。VS002A的详细安全数据见附件补充文件．

治疗程序

研究患者被放置在腹泻床上。根据icddr,b指南，估计WHO-ORS或VS002A的初始治疗剂量为每次大便后体重低于5-10毫升/公斤，以维持持续的排便损失。可能需要调整，根据测量的损失，使用更小或更大的体积来维持水化。孩子们用勺子喂食。评估和治疗将持续到腹泻症状消失为止。儿童应补充锌片:每天一片(20毫克)，持续10-14天[2］．

对于无法控制排尿的幼儿，应用小儿集尿袋(PUC)便于将粪便和尿液分开收集。

病人接受与年龄相适应的液体、半固体和固体食物。母乳喂养的儿童继续获得母乳。如果粪便培养发现任何病原体，那么患者接受适当的抗生素(如果适用)，并被排除在研究之外(例如，霍乱中的阿奇霉素)。口服补液盐、食物和药物的摄入由护士监督并记录。每4小时记录患者生命体征。每4小时记录口服补液盐和水的摄入量，连续记录排便、尿、呕吐物的排出量和排便频率。研究儿童的临床评估由研究调查员和/或指定的研究医生进行。由研究病房经验丰富的护士测量和记录生命体征和体重。其他测量，如大便频率和体积/重量、补液摄入量和排尿量，由指定的卫生工作者在研究护士的监督下测量，并由护士记录。密切监测每个参与儿童的任何不良事件的发生，如腹泻恶化或呕吐增加，并记录其严重程度和持续时间，并记录信息以供分析。

标准的管理

所有两组患者都将接受腹泻病的标准治疗，包括锌、补液和按照世卫组织指南进行的营养咨询。有些脱水的儿童将被补充水分并稳定下来。作为标准病例管理的一部分，如果他们的孩子不能喝水或母乳喂养，出现发烧，开始排便并持续腹泻，或病情加重，将建议护理人员立即就医。

试验后护理

此外，根据世卫组织标准指南，如果儿童出院接受进一步治疗后临床状况恶化，还将建议照顾者将其儿童带回卫生机构。

传播策略

我们计划在试验结束后向国际和国家科学成员以及孟加拉国政府的决策者传播试验结果。我们计划在国际同行评审期刊上发表我们的研究成果。

结果

主要的结果

腹泻住院时间(小时)

探索的结果

1. 一)

   住院后24小时排便量(g/kg体重)，进一步分为两个12小时时间段

2. b)

   住院期间总排便量(克/公斤体重)

3. c)

   住院后24小时口服ORS摄入量(g/kg体重)

4. d)

   口服补液盐总摄入量(ml/kg体重)

5. e)

   计划外IV(频率/ORS组)

6. f)

   治疗失败(次数/ORS组)

7. g)

   呕吐量和频率

8. h)

   体重变化(随机分组前和治疗后)

9. 我)

   住院后24小时排尿量(g/kg体重)

10. j)

    住院期间总排尿量(g/kg体重)

11. k)

    有记载的感染因子

12. l)

    血液化学(随机分组前至治疗24小时后)

13. 米)

    肠道健康生物标志物:随机化前和入组24小时后瓜氨酸(CIT)和犬尿氨酸与色氨酸之比(KT)

试验评估

参加试验的儿童在注册后随访长达120小时，或直到达到第一个主要终点(即腹泻解决)，以较早者为准。登记、干预和结果评估的时间表见表2，它遵循SPIRIT(为临床试验方案的最低内容提供循证建议的声明)指南。

实验室测试

例程

采用静脉穿刺采血测定血清电解质，入院时及入组后24小时测定血糖。所有患者的全血计数、血清肌酐、粪便常规检查、粪便细菌培养和轮状病毒抗原仅在入院时进行。其他临床实验室检查，如血清肌酐、血培养、尿液镜检/培养、粪便电解质和胸片，如临床需要，可进行并重复检查。

肠道健康指标

在前100名儿童的子样本中，测量血浆vitrulline (CIT)和kynurenine-tryptophan (KT)比值，以了解与环境肠功能障碍(EED)相关的变化。测试在登记时进行，登记24小时后在icddr,b lab进行，使用收集的血清进行常规血液测试，因此不需要额外的血液或静脉穿刺。在icddr,b上使用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法定量分析血浆CIT浓度。KT也在icddr,b使用液相色谱/四极杆飞行时间质谱(Q-TOF LC-MS)平台进行测试[17］．

中断程序

退出研究和治疗失败的标准

• 腹泻解决后出院(腹泻解决的工作定义如下)。然而，没有参与者在注册24小时前出院。

• 如果需要超过5天(≥120小时)才能解决腹泻问题，或者如果患者脱水需要不定期静脉输液，我们将患者转到普通病房进行进一步评估和治疗。在这种情况下，它被认为是“治疗失败”。

• 入组后，如果任何患者出现肺炎、败血症、电解质失衡等并发症或需要特殊抗生素和/或特殊注意/干预，我们将患者转移到医院的普通病房或ICU，并退出研究。研究团队将记录移除原因，并完成一份非研究文件。

• 决定退出研究的患者被定义为“退出”。

• 患者如果没有摄入至少80%的口服补液盐，则被认为是“不依从性的”。

• 如果粪便培养发现需要抗生素治疗的药物，则将患者从研究中移除，并由研究团队完成非研究文件。

• 收集到的随机受试者的所有数据均保留用于意向治疗分析，包括退出研究的患者(退出研究)、共发病或被定义为治疗失败或不依从性的患者。

定义

• 腹泻住院时间:以小时为单位，从随机到腹泻消失。

• 腹泻的解决:在一次软便/成形便或无便12小时之前，排出最后一次液体或半液体便[18］．

• 排便量:每个时间段(即每24小时和整个腹泻期间)的大便重量，单位为入院体重的克/千克。

• 口服补液盐和白水摄入量:口服补液盐或白水的总摄入量(毫升)为每公斤入院体重，以每个时间段表示。

• 治疗失败:如果入组后腹泻持续超过120小时，或由于进行性脱水需要不定期静脉输液，需要转到普通住院病房

• 非预定静脉注射:由于口服补液液无法维持水合作用而给予静脉补液

• 不符合:不能摄入≥80%的ORS

不良事件记录

所有不良事件，无论严重性、严重程度或与研究药物的关系，都记录在病例记录表的不良事件页上。符合严重不良事件定义的不良事件将在本研究提供的严重不良事件表上报告。不良事件将以清晰、明确的医学语言记录。所有在研究结束时未解决或在受试者停止研究时未解决的不良事件将被跟踪，直到事件解决、事件稳定或事件恢复到基线(如果有基线值可用)。所有严重不良事件均应在研究人员或其工作人员获悉后24小时内报告给icddr伦理审查委员会秘书处。通过icddr,b IRB在严重不良事件(SAE)表格上记录尽可能多的信息来进行报告。

质量保证

以下措施提供品质保证:

• 为研究人员提供广泛的初始和后续培训课程，重点是脱水评估，以确保研究人员之间的可靠性较高。

• ClaimIt门户中的实时电子数据捕获确保了数据验证，例如范围、逻辑检查和数据完整性。

• 所有研究人员都必须接受良好临床实践(GCP)培训和认证。

• 在整个研究期间，研究人员从数据管理助理那里收到简短的每周进展报告，并参加与捐赠者和CRO的定期每周zoom会议。每周的进展报告包括筛查儿童人数、登记儿童人数、治疗失败人数、退出人数、完成研究的儿童人数，以及目前在研究病房住院的儿童人数。

• 研究调查员负责确保研究人员的培训是严格和高质量的。他们根据需要安排测试和再培训。评估单个研究人员在整个研究人群中一致使用标准化入组标准和脱水评估的能力是研究研究者的关键职责。

• Entrinsic Bioscience、Obvio和其他由他们确定的公司将确保对研究地点进行结构化的监测访问。监测访问将以质量控制和改进研究实施为主要目的。监测员将直接观察所有有关的研究程序和数据管理活动。

• 数据管理助手每周运行一组范围和一致性检查，解决与站点的不一致或查询，并随着试验的进行提供数据摘要。查询在下一组每周检查报告之前被解决。

补偿

参加试验不提供经济补偿。

数据管理

外部数据管理系统(ClaimIt)确保数据收集和数据管理过程的协调。该研究网站收集了一组具有标准定义的核心变量的信息。一组范围和一致性检查应用于这些可用变量。研究地点负责数据输入和数据的初始清理，包括运行范围和一致性检查，以及对分布的定期审查和异常值的识别。Icddr,b解决其数据库中的任何不一致，与数据收集团队协商，并在需要时进行验证。研究地点需要提供关于ClaimIt数据库中核心变量集的数据。

统计方面的考虑

样本量和功率

总样本量为312名男性儿童。在以前对儿童进行的非霍乱研究中，比较抗腹泻药和安慰剂[19，20.，21，22]，每小时腹泻持续时间和24小时排便量的效应值分别为0.3 ~ 1.0(持续时间)和0.3 ~ 0.7(排便量)。与安慰剂相比，治疗后的预后改善幅度为15%至45%。根据每个结果中报告的汇总标准偏差，20%的临床显著改善产生0.4至0.7(持续时间)和0.3(排便量)的效应值。当应用常规alpha(0.05)和beta(0.20)值时，每组32 - 174例患者才有统计学意义。在24个月的时间里，每周3名患者的最大预期应计率导致每组156名患者，或假设15%的减员，每组132名患者。因此，最终预期的患者组数估计为>提供了99%和68%的能力，分别检测每小时腹泻持续时间和24小时粪便排出量的20%差异。

对摘录内容的论证，基于一个独立的样本t-test(在数据分析部分)，在表中进行了回顾3.．我们的样本量估计是基于检测主要结局变量(腹泻持续时间)的差异。我们承认我们对次要结果(如大便量)的研究不足。我们研究中的次要结果被更好地归类为探索性结果，这就是为什么我们没有针对多个终点调整alpha。

统计分析

数据收集在纸上，并以电子方式输入，捕获诸如人口统计学、病史、临床评估、临床病程等信息，并使用社会科学统计包(SPSS)(版本20)、STATA或同等工具转录到电子数据库中。初步分析将用于治疗分析，其中包括研究中随机抽取的所有患者。单方案分析也将只包括那些具有腹泻量疗效数据且服用至少80%研究产品的随机受试者。如果变量的分布不是正态分布，则在t检验分析之前对数据进行log变换或进行非参数等效检验。在对疗效终点进行统计分析之前，将检查两个治疗组(VS002A与WHO ORS)之间的基线特征差异。如果任何差异被认为是临床重要的，将对相关终点进行亚组分析。根据数量变量的正态分布，at-test或Mann-WhitneyU试验将用于比较腹泻持续时间、排便量、呕吐量和口服补液盐摄入量。卡方检验将用于比较治疗失败、非计划静脉注射和呕吐频率。主要结果的比较将在调整设计效果(年龄层)和患者特征(病因、入院时的临床特征、营养状况)的情况下进行。所有分析将根据方案分别对儿童进行，并在有意治疗的基础上对所有儿童进行。此外，还将进行寿命表分析。用log-rank检验比较止泻时间，用Cox比例危害回归对协变量进行调整。

一旦登记完成50%，将由第三方生物统计学家进行临时数据分析。中期分析不会对研究人群进行盲解或重新分组;评估将在整个患者队列中进行。分析将包括安全性和不良事件，口服补液盐摄入量的耐受性和依从性，以及随机分组后腹泻的严重程度/腹泻持续时间(以评估疾病的严重程度并确定样本量假设是否正确)。不进行疗效计算，也不进行组间比较。

审判管理

VS002A试验由现场调查员、Entrinsic Biosciences和Obvio试验协调员监督。该小组负责对试验进行全面监督。所有严重不良事件应在研究人员或其工作人员得知后24小时内报告给icddr伦理审查委员会(ERC)秘书处。报告应尽可能多地记录严重不良事件(SAE)发生时可用的信息。icddr,b的ERC将决定如何监督试验——他们可能会形成一份数据和安全监测计划(DSMP)，以确保数据和参与者在医学和伦理方面的安全。

DSMP包括五名成员，他们在临床试验、统计学、儿童死亡率评估、伦理和资源有限环境下的儿科护理方面具有专业知识。当在研究中累积了大约一半的参与者时，DSMP将审查中期数据分析，以确定是否已越过停止边界。本研究的SPIRIT检查表在附加文件中提供。

审计计划

VS002A试验将由著名的国际监测组织WAGAS(数据管理、质量控制、附加服务)进行监测。由于COVID-19大流行仍在继续，WAGAS将负责对试验活动进行远程监测。我们指定的研究人员(数据扫描助理)将扫描与研究相关的文件以及CRF和同意书，并将通过在线门户网站共享这些文件，患者的机密性将得到相应的维护，以便进行远程监测。研究团队还将在获得研究患者父母的适当同意后，提供研究活动的实时视频，以便进行远程监控。

协议的修正案

根据icddr,b IRB指南，如果将有任何协议修订，协议的每个版本以及CRF和同意书将提交给icddr,b IRB批准。

VS002A试验是一项随机双盲优势试验，测试基于氨基酸的ORS: VS002A相对于标准WHO-ORS在缩短婴幼儿非霍乱和急性水样腹泻病程方面的潜在作用。

据报道，标准口服补液盐中所含的葡萄糖可能导致无法从肠道充分吸收液体和电解质，从而以不同的病理生理方式加重腹泻[23，24］．虽然口服补液盐显著提高葡萄糖刺激的钠吸收和纠正脱水，但它并没有显著减少排便量，这是口服补液盐利用不足的主要原因之一[25，26］．然而，某些中性氨基酸(如甘氨酸、l -丙氨酸、l -谷氨酰胺)可以增强肠道对钠离子和水的吸收[5，27］．

比较含谷氨酰胺口服补液盐与世卫组织口服补液盐的三项临床试验表明，它在非霍乱腹泻儿童中没有任何临床优势[28］．所有试验的一个共同点是，所有含氨基酸的实验ORSs也含有不同量的葡萄糖(9 g/L至20 g/L);大多数溶液的渗透压较高(320 ~ 400 mosmol/L)。一项比较无糖谷氨酰胺口服补液盐与世卫组织口服补液盐的研究显示，对儿童急性非霍乱腹泻的疗效相似[29];值得注意的是，谷氨酰胺在刺激阴离子分泌方面的作用与葡萄糖类似[30.］．一项研究比较了急性腹泻儿童中l -异亮氨酸补充含葡萄糖ORS与WHO-ORS，但差异无统计学意义[31］．然而，在患有严重霍乱的成年患者中，补充l -组氨酸的口服补给液优于无组氨酸的口服补给液;实验溶液和对照溶液均以大米为基础，不含葡萄糖[32］．在另一项研究中，无糖肽基ORS被发现比WHO-ORS更有利于治疗儿童急性水泻[33］．

据观察，某些以氨基酸为基础的钠运输途径在应激时期成为主要的补偿途径[34］．这些途径可以用来补充肠上皮细胞的水分，恢复正常的肠道功能。放射后，8种特定的氨基酸保留了它们从肠腔的吸收能力，同时降低了细胞旁的渗透性:赖氨酸、天冬氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸和丝氨酸。

Enterade®是五种氨基酸(苏氨酸、缬氨酸、丝氨酸、酪氨酸和色氨酸)的专利混合物[6，7]用于预防治疗，Enterade调节肠跨膜蛋白促进肠营养绒毛再生，增加钠和水的吸收，减少氯化物和碳酸氢盐的分泌，并降低肠细胞旁通透性[7，35］．Enterade的益处已通过改善放射性肠炎小鼠的体重维持和生存，以及改善患中毒性肠道综合征的肿瘤患者的腹泻结果来证明[6］．

在一项多中心随机研究中，在一小部分能够保持研究干预依从性的受试者中，探索性分析显示，在接受大剂量化疗的患者中，使用Enterade®的严重腹泻明显减轻[36］．对神经内分泌肿瘤患者的回顾性图表回顾显示Enterade®高级肿瘤学配方具有潜在的止泻活性[35］．

Entrinsic Bioscience (EBS)开发了一种饮料(VS002)，利用氨基酸运输钠和水，在不刺激氯化物分泌的情况下恢复水和电解质。与葡萄糖一样，EBS氨基酸同时也通过增加上皮NHE3(钠-氢反转运蛋白3)来增加肠道钠通量。与葡萄糖不同，VS002还降低CFTR的表达，CFTR是一种肠道靶蛋白，在感染性腹泻反应中受到严重刺激[37］．由于吸收增加，分泌减少，净肠吸收优于VS002用于治疗腹泻。Trioral®ORS(口服补液盐:世卫组织治疗食物中毒、宿醉、腹泻、电解质替代品的新配方)在健康和患病(霍乱)大鼠肠道(n=每次试验3至8只动物)，采用单次肠道灌注(体外)[未发表数据]。与健康肠道(即仅含生理盐水)相比，腹泻患病肠道的净吸收减少。使用Trioral®ORS改善了病变肠道的净吸收，使用VS002进一步改善了净吸收。与Trioral®相比，VS002的净吸吸量更大，至少部分原因是Trioral®中存在的即使非常少量的葡萄糖也具有额外的氯化物分泌活性，这已通过使用chamber证明³⁶Cl和²⁴钠通量研究[30.，38]，以及在VS002中培养并使用western blot分析测量的肠组织中NHE3(钠吸收)的增加和囊性纤维化跨膜传导调节因子(CFTR)(氯化物分泌)活性的降低[37］．

对VS002的研究表明，VS002给药后迅速再水化以增加液体和电解质的吸收，收紧粘膜屏障，从而减少局部和全身炎症，并增加隐窝计数和绒毛高度，导致吸收表面积的增加(未发表的数据)。VS002给药没有毒性，对动物和人类的研究结果表明，VS002可以作为一种高度安全有效的支持性护理，取代标准ORS [8，39，40，41］．

在健康人体中的试验证明了VS002的安全性;以及补充水分的功效，与各种商业含糖饮料(运动饮料，ORS)相比[42］．这些研究对象包括腹泻的成年人、健康的士兵、年轻的大学生和老年人(60岁以上)。因此，使用8种氨基酸给药VS002以增加肠道水分和电解质吸收与安全补液有关。VS002被提供给印度尼西亚和菲律宾250名接受腹泻治疗的成年人。所有受试者对VS002的耐受良好，无不良事件[43，44］．

传统的口服补液盐含有糖，通过多种机制刺激肠道钠和水的吸收。然而，传统口服补液盐没有抗腹泻功能，并可能加剧感染性腹泻分泌物，这一点一直被低估(Yin et al.， 2017)。即使是极低浓度的葡萄糖也会在肠道中产生氯离子的净分泌。这一观察的机制是葡萄糖刺激anoctamin 1的表达，从而激活钙激活的氯通道[30.］．

利用这一概念，佛罗里达大学(UF)开发了一种无糖、耐储存的氨基酸水合药用食品，名为“VS002A”，可有效补水，并在胃肠道感染后改善肠道的屏障功能。EBS使用促分泌模型，结果是VS002A(天冬氨酸、精氨酸、丝氨酸、脯氨酸、苏氨酸、甘氨酸、丙氨酸和酪氨酸)。VS002A具有与VS002相同的5种氨基酸(天冬氨酸、甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸);VS002中的3个氨基酸(Isoleucine, Lysine, Valine)被VS002A中的其他3个氨基酸(Alanine, Arginine, Proline)取代，VS002A的总mM浓度和克重(g/L)与VS002相同。VS002A中的所有其他成分(例如，电解质，香料)也与VS002相同。因此，我们假设VS002A在治疗婴幼儿急性水样非霍乱腹泻方面的性能将显著优于VS002，并从根本上优于WHO-ORS。

试验状态

VS002A试验的招募于2021年6月开始，目前正在进行中。预计将于2022年9月结束。当前协议版本为1.079，日期为2021年5月22日。

限制

这项研究有其局限性。由于这是一项单中心试验，在一些脱水的男孩中，研究结果可能无法推广到其他情况。

在当前研究期间生成的数据集将在合理的要求下从通讯作者那里获得。

我们要感谢达卡医院的工作人员。我们非常感谢我们的患者积极参与这项试验。本研究方案由Entrinsic Bioscience和Obvio Health资助。我们感谢icddr的贡献，b的核心捐助者包括孟加拉国人民共和国政府，加拿大全球事务部(GAC)，加拿大;瑞典国际发展合作署和英国外交、联邦和发展办公室(FCDO)对icddr,b的研究工作的持续支持和承诺。

该研究由Entrinsic Bioscience Inc.， LLC资助;诺伍德，马萨诸塞州，美国。

作者及隶属关系

1. 孟加拉国国际腹泻病研究中心(icddr,b)，孟加拉国达卡

   Rina Das, Rukaeya Amin Sobi, Al-Afroza Sultana, Baitun Nahar, Pradip Kumar Bardhan和Tahmeed Ahmed

2. 埃默里大学罗林斯公共卫生学院环境卫生科学系，亚特兰大，佐治亚州，30322，美国

   Rina Das

3. 科技，Entrinsic Bioscience Inc.，波士顿，马萨诸塞州，美国

   劳拉·卢克和奥利维尔·方丹

4. BRAC大学詹姆斯·格兰特公共卫生学院，孟加拉国达卡，1212

   Tahmeed艾哈迈德

5. 华盛顿大学全球卫生系，华盛顿州西雅图，98104，美国

   Tahmeed艾哈迈德

贡献

所有署名作者均遵守《试验》的作者指南。所有作者都同意出版。所有作者都阅读并批准了最终的手稿。

相应的作者

对应到Rina Das．

伦理批准并同意参与

该试验已获得icddr,b伦理审查委员会(RRC和ERC)的批准。经批准的方案的每个更新版本将提交伦理委员会。在进行任何试验程序之前，研究人员应获得书面的知情同意(来自父母/护理人员)，并且在整个试验过程中按照ICH-GCP标准指南对参与者保密。

发表同意书

不适用。

相互竞争的利益

作者宣称他们之间没有利益冲突。

出版商的注意

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