研究方案:一项多中心、双盲、随机、6个月、安慰剂对照试验，研究固参安泰丸补充激素治疗FET周期对体外受精结局的影响

背景

不孕症是一个全球性的普遍挑战。目前，最有效的治疗不孕不育的策略是体外受精(IVF)，这是一种辅助生殖技术(ART)。体外受精辅助怀孕的使用可以追溯到过去41年，当时第一个体外受精婴儿出生。在体外受精过程中，在一个体外受精周期中获得许多卵母细胞，并形成多个胚胎。随后，冷冻解冻胚胎移植(FET)越来越多地用于体外受精周期，用于新鲜胚胎移植未能导致怀孕的妇女，或用于返回第二个婴儿的妇女。然而，据报道，FET治疗周期后的怀孕成功率低于新鲜胚胎移植。因此，近年来的相关研究正在增加提高FET持续妊娠率、降低早期流产率的决定机制。

固参安泰丸(GSATP)含有10种草药的混合物，作为预防流产的药理学选择，在中医中被广泛使用。然而，随机对照试验(RCT)从未对GSA亚博ag出账秒到TP的临床疗效提供高水平的临床证据。本研究的目的是探讨激素治疗(HT) FET周期的GSATP对怀孕率的影响。

方法

本研究将招募300名年龄在18 - 40岁之间为HT周期FET做准备的受试者。这些患者来自5家不同的医院，每家医院有60名患者。患者随机分为两组，子宫内膜转化当天开始用药。FET 28天后，b超检查以确定是否继续用药。在试验前进行基线评估，并在每个妊娠周期的4、6、8、10和12周收集结果。

讨论

统计分析两组持续妊娠率、临床妊娠率、着床率、先兆流产率的差异。我们终于可以客观评价中药固参安泰丸的疗效了。

试验注册

ChiCTR1900026737．注册于2019年10月20日。

不育症是一项全球性挑战，估计影响全球8%至12%的育龄夫妇[1］．作为一种有效的治疗方法，体外受精，自1978年第一个体外受精婴儿出生以来，抗逆转录病毒治疗已经被广泛使用了41年。以前，体外受精主要是通过移植新鲜胚胎来完成的。然而，近年来FET在体外受精方案中越来越重要[2］．

随着FET周期的增加，评估最佳子宫内膜准备对于最大限度地提高ART的成功率至关重要[3.］．此外，FET有助于最大限度地提高每次卵母细胞提取的累积怀孕率。先前的临床研究报道FET周期的怀孕率低于新鲜的体外受精/胞浆内精子注射(ICSI)周期[4］．然而，最新的大型回顾性队列研究发现FET周期与新鲜周期之间没有显著差异[5］．此外，由于人们越来越关注可控卵巢刺激(COS)对子宫内膜和子宫环境的不良影响，FET也越来越受欢迎[6］．目前的研究主要集中在不同的周期方案，如自然周期和HT周期，用于子宫内膜制备FET [7］．虽然自然排卵周期是自发的，但HT周期使用雌激素和孕激素来制备子宫内膜，因此更精确。

虽然荟萃分析的结果显示，雌激素补充的类型和给药途径不影响fet的成功率[8]，孕激素给药途径和剂量的影响仍有争议[9，10］．有趣的是，通过meta分析，我们没有发现自然循环FET和HT循环FET之间的效率和安全性差异[11]，这在另一项研究中也得到了证实[7，12］．在Givens等人进行的一项研究中，HT周期FET组发现流产率更高，活产率也没有差异[13］．

固参安泰丸由中药加工而成，是现代药学技术的经典方剂。该药由10种草药混合而成，在中国被广泛用作预防流产的药理学选择[14，15］．值得注意的是，GSATP已获得中国国家食品药品监督管理局(SFDA)的批准。根据中医理论，肾气充沛代表生殖能力强，而肾气旺盛，从而使母亲和胎儿处于稳定的状态。GSATP主要用于补肾，与草本成分相辅相成。这药丸是由十种珍贵的中草药(蓼属植物multiflori，地黄，肉苁蓉，雷公藤，雷公藤，基数白术，基数macrocephala，黄芩，基数Paeoniae，Rubra，菟丝子，钩藤,桑树拟寄生物)通过长期的临床实践和优化配伍。根据中医理论，GSATP可以预防流产。严格辨证、深加工，可提高中药安全性[16，这也是GSATP所追求和做的。在多年的GSATP使用过程中，没有不良反应(ADR)的报道。

提高HT循环FET的成功率是一个尚未得到充分研究的复杂过程。因此，在这种复杂疾病的治疗中，多靶点疗法，如中医，可能比西医普遍使用的单靶点疗法具有独特的优势[17］．

虽然GSATP在患者中的反应很好，但缺乏高质量的循证医学限制了它的广泛使用。循证医学、现代医学和中医的结合是一个令人兴奋的领域，一直受到广泛关注和努力[18］．因此，应开展大型多中心、双盲、随机、安慰剂对照试验，以开发一种基于GSATP的简单、廉价、广泛实用的口服药物治疗方法。

目标

主要目标和次要目标

本试验的主要目的是评估和验证GSATP的临床疗效及其对HT FET周期持续妊娠率(OPR)的影响。次要目的是确定GSATP是否影响HT周期fet的着床率(IR)、临床妊娠率(CPR)和先危流产率(TAR)。

诊断标准

GSATP适用于中医肾阴虚型早期先兆流产(TA)。早期TA是指妊娠12周内出现的先兆流产，主要表现为阴道少量出血，阵发性下腹痛或腰痛，宫颈口未开，胎膜未损坏，子宫大小与孕周一致[19］．中医肾阴虚证，只要腰膝酸软，并伴有以下症状之一:下腹坠痛，或伴有头晕耳鸣、口干喉干、精神乏力、掌底发热，即可诊断。

招聘

我们从山东中医药大学附属医院、枣庄妇幼保健院、山西省妇幼保健院、温州医科大学第一附属医院、济南军区总医院这五家三级医院的生殖中心招募了有意做FET的参与者。这5家医院均为三级甲等公立医院，具有IVF-FET资质，每家医院招募患者60例。为保证各试验点程序的一致性，在试验开始前统一进行培训。试验期间，各站点通过网络及时沟通，并由专业人员定期检查进度，确保试验的一致性和统一性。本研究依据《赫尔辛基宣言》开展，经山东中医药大学附属医院生殖医学伦理委员会批准(批准文号20191109)。研究入组前获得患者书面知情同意。收集患者的前瞻性基线数据，包括身高、体重、基本内分泌水平、IVF过程详细记录。在进行任何研究程序之前，均获得患者的知情同意。我们估计完成这一阶段的测试需要大约6个月的时间。研究流程图如图所示。1．

入选标准

符合以下纳入标准的患者被纳入研究:

1. ①

   年龄:22-40岁

2. ②

   有两个或两个以上高质量可移植冷冻胎儿的患者

3. ③

   接受HT周期FET的患者

4. ④

   既往FET周期少于3个，≤2次不明原因流产，≤2次植入失败的患者

5. ⑤

   未接受类似药物治疗的病人

6. ⑥

   无精神病史，肝肾功能及心电图无异常者

排除标准

本研究采用的排除标准如下:

1. ①

   BMI≥30 kg/m²

2. ②

   生殖系统发育异常，男女染色体核型均有一个异常的患者

3. ③

   全身重大疾病患者

4. ④

   子宫内膜异位症、子宫腺肌症、输卵管积液患者

5. ⑤

   既往有子宫内膜异位症的患者

分配隐藏机制

根据R软件中计算机生成的随机时间表，由一名对治疗分配不知情的评估人员按1:1的比例将参与者随机分配到对照组或实验组。任务隐藏是有保证的，因为我们的实验从测试一开始就确定了受试者。主体的不确定性可以充分保证配置隐藏的效果。

临床恢复由一名对治疗分配不知情的评估人员进行评估。评估员在研究完成前接受了全面培训。由于医学专业的专业性，无论是参与者还是工作人员的分配都不是盲目自然的，但在随后的评估中，参与者的分布情况并没有公开。患者相关信息如OPR、CPR、IR、TAE由非直接参与实验的人员收集。医生们只在试验结束时收集信息。

潜在风险及处理

虽然GSATP具有安全的药理使用历史，但我们不排除它的使用可能会引起一些副作用。目前报道的中药不良反应主要有胃肠道反应、肝、肾损害。随后，患者被提前告知潜在的风险。

患者和公众参与

患者既不参与研究问题的发展，也不参与研究的设计和招募。然而，参与研究的患者被随机分为两组，分别服用GSATP和安慰剂。本研究使用的药物费用由课题组承担，患者自己不承担部分费用。

研究结果将通过微信通知、患者组织平台和公共信息会议向参与者及其家属传播

干预措施

采用随机双盲对照法，按照GSATP与安慰剂1:1的比例筛选出符合条件的患者。GSATP(产品规格:6g * 9袋)和安慰剂(淀粉为原料，不含有效成分)均来自北京麸皮药业股份有限公司，并由北京麸皮药业股份有限公司按照中国国家食品药品监督管理局国家药品标准重新标识。本文对GSATP在先兆流产治疗中的应用研究与已发表说明书中的适应症一致。

在子宫内膜转化前4小时口服常规剂量GSATP (6g tid)或安慰剂(6g tid)。我们要求病人每天按时吃药。临床妊娠经FET术后28天b超分析确认。孕妇口服治疗持续到怀孕12周，但没有怀孕的患者不给药。不良事件包括异位妊娠患者。医生和病人都不知道注射器内容的身份。允许患者在紧急情况下使用其他药物，但这类患者的数据不纳入统计分析。

在初始产品配发期间和每次随访时进行依从性提醒。事先向患者传达了以下内容:遵守日常研究产品说明书的重要性，包括所用时间，适当储存研究药物和制作整个研究药物的重要性，以及在错过剂量时应采取的措施。我们的一名工作人员定期通过微信联系患者，询问药物治疗情况。

安全评估

所有受试者在用药期间均由包括主任医师在内的医务人员进行管理和随访。FET后第2、5、7、9和10周在门诊进行随访，记录用药期间的任何局部和/或全身反应以及整个研究过程中的任何不良事件。由于中医的靶点范围广泛，每次随访时也会记录患者潜在的有益或不良反应。所有局部和全身不良事件，无论其严重程度如何，都将被记录。用药过程中一旦出现不良反应，立即停药，医务人员根据情况观察处理。患者的问卷用于收集其他药物相关症状的数据。

结果测量

主要终点为妊娠第12周的OPR。次要终点为IR、CPR和TAR。在实验结束时测量OPR、IR、CPR和TAR。在第1天、第7天和第14天，在FET中监测和记录激素水平。IR(%) =着床胎囊数/移植胚胎数× 100%， CPR(%) =临床妊娠数/移植周期数× 100%， OPR(%) =连续妊娠数/移植周期数× 100%， TAR(%) =流产数/临床妊娠数× 100%(表1）.

统计分析

样本大小

样本量的计算基于一项初步研究[20.]，显示观察组持续妊娠率显著高于对照组(63.83% VS 42.86%，x²= 4.24,P< 0.05)。估计OPR为0.6。按1:1配比，GSATP疗效65%，α= 0.05,β=0.2时，治疗组130例，安慰剂组130例。考虑到临床实践的复杂性，损失率估计为0.1。最后，计算样本量为300名受试者。

分析

研究数据由非临床人员收集和管理，他们负责每个临床中心的数据管理。数据显示如下:具有正态分布的连续变量以均值±SD表示，计数数据以n(%)表示。使用SPSS 21版软件(SPSS, Inc.， Chicago, IL)进行统计。两组之间的差异是用χ²用于计数数据或t检验，用于测量数据的比较分析。P小于0.05为有统计学意义。

据我们所知，与安慰剂治疗相比，这是第一个调查GSATP作为辅助药物对体外受精结果的有效性和安全性的研究方案。虽然FET提高了累积怀孕率，降低了成本，并且与新鲜胚胎移植的重复IVF或ICSI周期相比相对简单和节省时间，但FET治疗周期后的怀孕率一直被认为低于新鲜胚胎移植[11］．HT的优点是对转移时间的高度控制和灵活性，可以在不影响IR和CPR的情况下改变滤泡期的长度。然而，研究发现HT FET周期可能与不良的孕产妇和新生儿结局有关，如妊娠高血压疾病和低出生体重儿的高风险[21，22］．虽然GSATP辅助治疗HT FET周期已被证明是有益的，但治疗效果的证据仅限于小样本量或短期随访[20.］．因此，需要更大样本量的随机双盲安慰剂对照试验来验证其确切效果。

根据中医“肾主生殖”的理论，女性不孕与肾虚密切相关，其主要治疗原则是补肾。根据中医辨证论治，回顾性研究485例先兆流产患者，发现中医证型分布以肾虚为主，这也与中医理论相吻合[23］．GSATP是对中医经典方剂的一种改变。中医的主要作用是补肾、防孕。GSATP自中国国家食品药品监督管理局批准以来，已在临床应用十余年，取得了良好的疗效。

现代药理学研究发现，中药钩藤、桑蚕有降压作用，因此对妊娠期高血压疾病有较好的疗效[24，25]，这是上面提到的HT FETcycle的副作用之一。此外，菟丝子可通过显著改善卵巢内分泌功能，促进胎盘hCG分泌，促进胚胎发育[26］．临床发现，有些人在怀孕期间会出现便秘症状，而GSATP的某些成分可以缓解便秘[27]。因此，在实验过程中，我们也会对便秘的缓解情况进行跟踪。

本研究为多中心双盲临床试验，存在一定局限性。该试验并不能完全排除临床治疗的偏倚。在比较两组患者时，很难保证患者有相似的背景。此外，本研究完成的12周随访时间有限，后期需要更长的随访以提供更可靠的结果。

总之，本研究的结果有望为GSATP辅助治疗HT FET循环的有效性和安全性提供高质量的方法学证据。

本研究由国家自然科学基金(NSFC: 81874484)资助，山东中医药大学附属医院生殖医学伦理委员会批准。

在研究开始前，获得患者的书面知情同意。数据的处理、记录和存储遵循我们的道德委员会提供的指导方针。我们的研究成果将发表在各种同行评审期刊上，并在科学会议上发表。

本研究的优势和局限性

1. 1）

   本试验旨在确定在HT周期FET治疗预防流产中补充GSATP的临床获益和统计学意义。

2. 2）

   该试验不仅是首个关于GSATP的多中心双盲RCT，也是对GSATP临床实际疗效的科学评价。

3. 3）

   本试验可为现代中成药科学研究不违背中医理论的意义提供极好的示范和激励。

4. 4）

   本研究随访12周时间有限，随访时间越长，结论越可靠。

5. 5）

   多中心研究耗时、体力消耗大、成本高，因此可能不适合许多中医研究人员。

本研究的结果将通过会议论文、研究报告和学术出版物广泛传播。

在研究过程中产生和/或分析的所有数据将在手稿中展示，其他详细数据可根据合理要求从通讯作者处获得。

场效应晶体管:

冷冻-解冻胚胎移植

试管婴儿:

体外受精

艺术:

辅助生殖技术

GSATP:

Gushen 'antai药丸

HT:

激素疗法

因为:

控制性卵巢刺激

ICSI:

胞浆内精子注射

个随机对照试验:

随机对照试验亚博ag出账秒到

CSFDA:

中国国家食品药品监督管理局

美国存托凭证:

药物不良反应

中医:

中医

我们感谢孙振高博士和宋景岩博士对研究设计的宝贵支持。我们也感谢负责实验的研究人员为产生这些结果所付出的巨大努力，感谢患者和患者顾问的支持，以及提供药物的各种制药公司。

出处和同行评审

不适用。

本研究由国家自然科学基金(NSFC: 81674018)资助。他们只提供资金支持，不参与实验的任何步骤。

作者指出

1. 马英杰和曹贤玲对这项工作同样作出了贡献。

作者及隶属关系

1. 山东中医药大学，济南250011

   马英杰，曹宪玲，马婷，宋景燕，于凌宇，于阳阳，赵建云

2. 山东中医药大学附属医院生殖与遗传中西医结合研究中心，济南文华西路42号，250011

   马英杰，曹贤玲，宋景燕，于凌宇，于阳阳，赵建云，孙振高

贡献

CXL和MYJ撰写了这份手稿。SZG和SJY设计了这项研究。MYJ起草并修改了手稿。YYY、YYY、ZJY、TX参与数据处理。作者们阅读并批准了最终的手稿。

相应的作者

对应到Zhen-Gao太阳．

伦理批准并同意参与

所有患者均获得知情同意，方案在进行任何研究程序前均经山东中医药大学附属医院生殖医学伦理委员会批准。

发表同意书

所有作者同意发表。

相互竞争的利益

作者宣称他们之间没有利益冲突。

出版商的注意

怎么样下载亚搏施普林格自然对出版的地图和机构从属关系中的管辖权主张保持中立。

基础项目

经方对“内经”“气气”理论筛选老年IVF-ET患者卵泡液生物标志物的影响(批准号:81674018)

开放获取本文遵循知识共享署名4.0国际许可协议，允许以任何媒介或格式使用、分享、改编、分发和复制，只要您对原作者和来源给予适当的署名，提供知识共享许可协议的链接，并注明是否有更改。本文中的图像或其他第三方材料包含在文章的创作共用许可协议中，除非在材料的信用额度中另有说明。如果材料未包含在文章的创作共用许可协议中，并且您的预期使用不被法定法规所允许或超出了允许的使用范围，您将需要直接获得版权所有者的许可。如欲查看本牌照的副本，请浏览http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/．创作共用公共领域奉献弃权书(http://creativecommons.org/publicdomain/zero/1.0/)适用于本条所提供的资料，除非在资料的信用额度中另有说明。

转载及权限